探究白芨組織培養的最適培養基
發布者：admin 發布時間：2016-09-10 10:57:00
探究白芨組織培養的最適培養基
白芨為蘭科草本球根植物，又名紫蘭、連及草、甘根、白給，植株高18-60厘米。白芨的初生假鱗莖是圓球形，生長到一定程度才形成V字形塊狀假鱗莖。葉4-6枚，狹長圓形或披針形，長8-29厘米，寬1.5-4厘米，先端漸尖，基部收狹成鞘并抱莖。白芨喜涼爽氣候及腐殖質豐富而排水良好的砂壤土，半陽地也可栽培，但干旱、高溫，會使葉片枯萎黃。3月下旬萌芽，霜后地上枝葉枯萎，白芨的花粉呈塊狀不易散開，所以在授粉上也不是很有利。白芨的種子極細小，似粉末，狀沒有胚乳，只有幾個細胞構成的發育不完全的胚，種子萌發率極低 ,且自然繁殖困難 ,所以野生資源較稀少 ,是我國的一種珍稀瀕危的保護植物。白芨屬有九個種類，產于中國的就有四種，白芨在我國長江流域及以南地區均有分布，生長區域較廣。由于多年的掠奪式采挖，加上生境日惡化，使得野生白芨的數量急劇減少，瀕臨滅絕邊緣。白芨的主要化學成分是聯芐類、菲類及其衍生物,此外,還含有少量揮發油,粘液質,白及甘露聚糖以及淀粉(30.5%),葡萄糖 (1.5%)等。最近幾年,對白及的化學成分研究主要集中在聯芐類、二氫菲類和聯菲類化合物上,并從中分離鑒定出一系列新的聯芐、二氫菲和聯菲化合物。白芨具有收斂止血、清熱解毒、消腫生肌之功效。隨著我國中醫藥事業的發展，白芨在臨床上的應用范圍不斷擴大，白芨的用藥需求急劇增加。但白芨種子在自然條件下很難萌發和生長，實生苗的栽培較為困難，僅靠分株繁殖，周期長，繁殖效率低，而且耗種量大，很難滿足大量栽培的需要。白芨正面臨著資源難以滿足市場的嚴峻現實。
本試驗采用白芨種子為材料，利用組織培養方法進行無性繁殖，旨在為實現白芨種苗的規模化生產提供快速擴繁技術支持。
實驗目的:
通過不同的基本培養基，不同激素濃度配比、有機物濃度等對白芨組織快繁的影響。篩選得到白芨組織培養的最佳培養基配方,建立白芨組織快繁體系。
實驗方法：
以MS或1/2MS為基本培養基，添加不同濃度的激素，有機添加劑等，觀察白芨種子的萌發，增殖，生根情況，找出最佳培養基配方。
材料：
人工栽培的白芨成熟未開裂蒴果
實驗用具及藥品：
超凈工作臺、高壓滅菌鍋、光照培養箱、鑷子、濾紙、無菌水、乙醇、升汞、MS培養基，1/2MS培養基、萘乙酸（NAA）、細胞分裂素（6-BA）、KT、IBA、土豆、活性炭、蔗糖等。
實驗步驟：
1， 配制培養基(各1L)
以下培養基均加入6.8-7.5g/L瓊脂粉，Ph5.6- 5．8，高壓滅菌鍋中l2l℃下滅菌20min。
1.種子萌發培養基：
|
標號 |
基礎培養基 |
6-BA (mg/l) |
NAA (mg/l) |
2,4-D (mg/l) |
KT (mg/l) |
IBA (mg/l) |
活性碳 (g/l) |
土豆 （g/l） |
蔗糖 （g/l） |
|
1 |
MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
2 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
3 |
1/5MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
|
30 |
|
4 |
MS |
0.1 |
1.0 |
|
|
|
2 |
|
40 |
|
5 |
MS |
0.1 |
1.0 |
|
|
|
2 |
|
30 |
|
6 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
0.1 |
|
|
|
30 |
|
7 |
1/2MS |
|
0.5 |
|
0.1 |
|
|
|
30 |
|
8 |
1/2MS |
0.5 |
0.5 |
|
|
|
|
|
30 |
|
9 |
1/2MS |
0.5 |
|
0.5 |
|
|
|
|
30 |
|
10 |
MS |
|
1.0 |
|
|
0.1 |
|
|
30 |
|
11 |
1/2MS |
|
1.0 |
0.3 |
|
0.2 |
|
|
30 |
|
12 |
1/2MS |
0.1 |
|
|
0.5 |
0.1 |
|
|
30 |
|
13 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
30 |
30 |
|
14 |
1/2MS |
|
1.0 |
|
|
|
|
40 |
30 |
2.增殖培養基：
<|
標號 |
基礎培養基 |
6-BA (mg/l) |
NAA (mg/l) |
2,4-D (mg/l) |
KT (mg/l) |
IBA (mg/l) |
活性碳 (g/l) |
土豆 （g/l） |
蔗糖 （g/l） |
|
1 |
MS |
1.0 |
0.1 |
|
|
|
|
|
30 |
|
2 |
MS |
1.0 |
|
0.5 |
|
|
|
|
30 |
|
3 |
MS |
1.0 |
0.5 |
|
1.0 |
|
|
|
30 |
|
4 |
MS |
1.0 |
0.5 |
|
|
0.5 |
|
|
30 |
|
5 |
1/2MS |
1.0 |
0.1 |
|
|
|
|
|
30 |
|
6 |
1/2MS |
|
|
0.5 |
1.0 |
|
|
|
30 |
|
7 |
1/2MS |
1.0 |
|
0.5 |
|
|
1.0 |
|
30 |
|
8 |
1/2MS |
0.8 |
|
